Нематоди санавбар як эндопаразити муҳоҷири карантинӣ мебошад, ки дар экосистемаҳои ҷангали санавбар талафоти шадиди иқтисодӣ мерасонад. Тадқиқоти мазкур фаъолияти нематицидии индолҳои галогендорро бар зидди нематодҳои санавбар ва механизми амали онҳо баррасӣ мекунад. Фаъолияти нематицидии 5-иодоиндол ва авермектин (назорати мусбӣ) бар зидди нематодҳои санавбар шабеҳ буд ва дар консентратсияи паст (10 мкг/мл) баланд буд. 5-иодоиндол ҳосилхезӣ, фаъолияти репродуктивӣ, фавти ҷанин ва кирмча ва рафтори ҳаракатро коҳиш дод. Таъсири мутақобилаи молекулавии лигандҳо бо ретсепторҳои канали хлориди глутамат, ки ба сутунмӯҳраҳо хос аст, ақидаро дастгирӣ мекунад, ки 5-иодоиндол ба монанди авермектин ба макони фаъоли ретсепторҳо зич мепайвандад. 5-Иодоиндол инчунин деформатсияҳои гуногуни фенотипиро дар нематодҳо ба вуҷуд овард, аз ҷумла шикасти ғайримуқаррарии узвҳо / коҳишёбии вакуолизатсия. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки вакуолҳо метавонанд дар марги метилизатсияи нематодҳо нақш бозанд. Муҳим он аст, ки 5-иодоиндол барои ҳарду намуди растанӣ (карам ва шалғам) заҳролуд набуд. Ҳамин тариқ, ин тадқиқот нишон медиҳад, ки истифодаи йодоиндол дар шароити муҳити зист метавонад осеби вилти санавбарро назорат кунад.
Нематодҳои чӯби санавбар (Bursaphelenchus xylophilus) ба нематодҳои чӯби санавбар (PWN) тааллуқ доранд, ки нематодҳои эндопаразитии муҳоҷиркунанда маълуманд, ки ба экосистемаҳои ҷангали санавбар зарари ҷиддии экологӣ мерасонанд1. Бемории вилти санавбар, ки аз нематоди санавбар ба вуҷуд омадааст, дар як қатор қитъаҳо, аз ҷумла Осиё ва Аврупо ба мушкилоти ҷиддӣ табдил ёфта, дар Амрикои Шимолӣ нематод навъҳои воридшудаи санавбарро нест мекунад1,2. Коҳиши дарахтони санавбар як мушкилоти асосии иқтисодӣ буда, дурнамои паҳншавии он дар ҷаҳон нигаронкунанда аст3. Навъҳои зерини санавбар бештар ба нематодҳо ҳамла мекунанд: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii ва Pinus radiata4. Нематоди санавбар як бемории ҷиддӣ аст, ки метавонад дарахтони санавбарро дар тӯли ҳафтаҳо ё моҳҳои сироят кушад. Илова бар ин, хуруҷи нематодҳои санавбар дар экосистемаҳои гуногун маъмул аст, аз ин рӯ занҷирҳои сироятии доимӣ таъсис дода шудаанд1.
Bursaphelenchus xylophilus як нематоди карантинии растанӣ-паразитӣ, ки ба супероилаи Aphelenchoidea тааллуқ дорад ва синфи 102.5 мебошад. Нематод бо занбӯруғҳо ғизо дода, дар бофтаҳои чӯби дарахтони санавбар афзоиш ёфта, ба чор марҳилаи гуногуни кирмчинӣ табдил меёбад: L1, L2, L3, L4 ва фарди калонсол1,6. Дар шароити нарасидани озуқа, нематоди санавбар ба марҳилаи махсуси кирмчинӣ - дауэр мегузарад, ки барандаи он - гамбӯсаки пӯсти санавбар (Monochamus alternatus) паразитӣ мекунад ва ба дарахтони санавбар солим мегузарад. Дар мизбонҳои солим, нематодҳо зуд тавассути бофтаҳои растанӣ муҳоҷират мекунанд ва бо ҳуҷайраҳои паренхиматӣ ғизо мегиранд, ки дар давоми як сол пас аз сироят ба як қатор аксуламалҳои ҳассосият, пажмурдани санавбар ва марг оварда мерасонад1,7,8.
Муборизаи биологии нематодҳои санавбар муддати тӯлонӣ мушкил буд ва чораҳои карантинӣ ба асри 20 рост меоянд. Стратегияҳои кунунии мубориза бо нематодҳои санавбар пеш аз ҳама табобатҳои кимиёвиро дар бар мегиранд, аз ҷумла фумигацияи ҳезум ва имплантатсияи нематсидҳо ба танаи дарахт. Нематицидҳои маъмултарин истифодашаванда аввермектин ва бензоати авермектин мебошанд, ки ба оилаи авермектин тааллуқ доранд. Ин кимиёвии гаронбаҳо бар зидди бисёре аз навъҳои нематодҳо самаранок мебошанд ва аз ҷиҳати экологӣ бехатар ҳисобида мешаванд9. Бо вуҷуди ин, истифодаи такрории ин нематсидҳо интизор меравад, ки фишори селекциявӣ ба вуҷуд ояд, ки тақрибан ба пайдоиши нематодҳои санавбар тобовар оварда мерасонад, чуноне ки барои якчанд ҳашароти зараррасон, аз қабили Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella ва нематодҳои Trichostrongylus colubriformis ва Ostertagia муқовимат ба таври градуалӣ инкишоф ёфтаанд. авермектинҳо 10,11,12. Аз ин рӯ, намунаҳои муқовимат бояд мунтазам омӯхта шаванд ва нематсидҳо пайваста тафтиш карда шаванд, то чораҳои алтернативӣ, камхарҷ ва аз ҷиҳати экологӣ тоза барои мубориза бо PVD пайдо шаванд. Дар даҳсолаҳои охир як қатор муаллифон истифодаи экстрактҳои растанӣ, равғанҳои эфирӣ ва моддаҳои идоранашавандаро ҳамчун агентҳои мубориза бо нематодҳо пешниҳод карданд13,14,15,16.
Мо ба наздикӣ дар Caenorhabditis elegans 17 фаъолияти нематицидии индол, як молекулаи сигнали байниҳуҷайравӣ ва байнишоҳигариро нишон додем. Индол як сигнали густурдаи дохили ҳуҷайра дар экологияи микробҳо буда, функсияҳои сершуморро назорат мекунад, ки ба физиологияи микробҳо, ташаккули спораҳо, устувории плазмидҳо, муқовимат ба маводи мухаддир, ташаккули биофилм ва вирусентӣ таъсир мерасонад 18, 19. Фаъолияти индол ва ҳосилаҳои он бар зидди дигар нематодҳои патогенӣ омӯхта нашудааст. Дар ин таҳқиқот, мо фаъолияти нематицидии 34 индолро бар зидди нематодҳои санавбар таҳқиқ кардем ва механизми амали пурқуввати 5-иодоиндолро бо истифода аз микроскопия, аксбардории вақт ва таҷрибаҳои пайвастагии молекулавӣ фаҳмидем ва таъсири заҳрноки онро ба растаниҳо бо истифода аз таҳлили нашъу тухмӣ арзёбӣ кардем.
Консентратсияи баланди (>1,0 мм) индол қаблан гузориш дода шуда буд, ки ба нематодҳо17 таъсири нематицидӣ доранд. Пас аз муолиҷаи B. xylophilus (марҳилаи омехтаи ҳаёт) бо индол ё 33 ҳосилаҳои гуногуни индол дар 1 мм, марги B. xylophilus тавассути ҳисоб кардани нематодҳои зинда ва мурда дар гурӯҳҳои назоратӣ ва табобатшуда чен карда шуд. Панҷ индолҳо фаъолияти назарраси нематицидиро нишон доданд; зинда мондани гурӯҳи назоратии табобатнашуда пас аз 24 соат 95 ± 7% буд. Аз 34 индоли санҷидашуда, 5-иодоиндол ва 4-фториндол дар 1 мм боиси марги 100%, дар ҳоле ки 5,6-дифториндиго, метилиндол-7-карбоксилат ва 7-иодоиндол тақрибан 50% фавтро ба вуҷуд оварданд (Ҷадвали 1).
Таъсири 5-иодоиндол ба ташаккули вакуолҳо ва мубодилаи нематоди ҳезуми санавбар. (A) Таъсири авермектин ва 5-иодоиндол ба нематодҳои наринаи калонсолон, (B) тухмҳои нематодҳои марҳилаи L1 ва (C) мубодилаи моддаҳои B. xylophilus, (i) вакуолҳо дар 0 соат мушоҳида карда нашуданд, табобат ба (ii) вакуолҳо, (iii) ҷамъшавии вакуолҳо, (iii) ҷамъшавии вакуолҳо, вакуолҳо (вакуолҳо) омезиши вакуолҳо ва (vi) ташаккули вакуолҳои азим. Тирҳои сурх варам кардани вакуолҳоро нишон медиҳанд, тирҳои кабуд ба омезиши вакуолҳо ва тирҳои сиёҳ аз вакуолҳои азим ишора мекунанд. Сатри миқёс = 50 мкм.
Илова бар ин, ин тадқиқот инчунин раванди пайдарпайи марги метанро дар нематодҳои санавбар тавсиф кардааст (Расми 4C). Марги метаногенӣ як навъи ғайриапоптозии марги ҳуҷайра мебошад, ки бо ҷамъшавии вакуолҳои намоёни ситоплазмӣ алоқаманд аст27. Нуқсонҳои морфологие, ки дар нематодҳои санавбар мушоҳида мешаванд, ба механизми марги метан вобастагии зич доранд. Муоинаи микроскопӣ дар вақтҳои гуногун нишон дод, ки вакуолҳои азим пас аз 20 соати таъсири 5-иодоиндол (0,1 мм) ба вуҷуд меоянд. Вакуолҳои микроскопӣ пас аз 8 соати табобат мушоҳида карда шуданд ва шумораи онҳо пас аз 12 соат зиёд шуд. Пас аз 14 соат якчанд вакуолҳои калон мушоҳида карда шуданд. Якчанд вакуолҳои муттаҳидшуда пас аз 12-16 соати табобат ба таври возеҳ намоён буданд, ки нишон медиҳанд, ки синтези вакуолҳо асоси механизми марги метаногенӣ мебошанд. Пас аз 20 соат дар тамоми кирм якчанд вакуолҳои азим пайдо шуданд. Ин мушоҳидаҳо гузориши аввалини метуоз дар C. elegans мебошанд.
Дар кирмхои бо 5-иодоиндол муоличашуда низ агрегация ва кандашавии вакуолхо мушохида карда шуданд (расми 5), ки ин аз хам шудани кирм ва ба мухит баровардани вакуолхо шаходат медихад. Вайроншавии вакуолҳо инчунин дар мембранаи пӯсти тухм мушоҳида карда шуд, ки одатан ҳангоми баромадан аз L2 солим нигоҳ дошта мешавад (Расми иловагӣ S2). Ин мушоњидањо иштироки љамъшавии моеъ ва нокомии осморегуляторї, инчунин осеби бозгашти њуљайрањоро (RCI) дар љараёни ташаккули вакуолњо ва ѓизої дастгирї мекунанд (расми 5).
Нақши йодро дар ташаккули вакуолҳои мушоҳидашуда фарзия карда, мо фаъолияти нематицидии йодиди натрий (NaI) ва йодиди калийро (КИ) тафтиш кардем. Аммо, дар консентратсияҳо (0,1, 0,5 ё 1 мм), онҳо ба зинда мондани нематодҳо ё ташаккули вакуолҳо таъсир намерасонданд (Расми иловагӣ. S5), гарчанде ки 1 мм KI таъсири каме нематицидӣ дошт. Аз тарафи дигар, 7-иодоиндол (1 ё 2 мМ), ба монанди 5-иодоиндол, вакуолҳои сершумор ва деформатсияҳои сохториро ба вуҷуд овард (Расми иловагии S6). Ду йодоиндол дар нематодҳои санавбар хусусиятҳои фенотипии шабеҳро нишон доданд, дар ҳоле ки NaI ва KI ин тавр набуданд. Ҷолиб он аст, ки индол дар консентратсияи санҷидашуда дар B. xylophilus ташаккули вакуолҳоро ба вуҷуд наовард (маълумот нишон дода нашудааст). Ҳамин тариқ, натиҷаҳо тасдиқ карданд, ки комплекси индол-йод барои вакуолизатсия ва мубодилаи B. xylophilus масъул аст.
Дар байни индолҳое, ки барои фаъолияти нематицидӣ санҷида шудаанд, 5-иодоиндол нишондиҳандаи баландтарини лағжишро дошт -5,89 ккал/мол, пас аз он 7-иодоиндол (-4,48 ккал/мол), 4-фториндол (-4,33) ва индол (-4,03) (расми 6) буд. Пайвастагии қавии гидрогени 5-иодоиндол бо лейцин 218 пайвастагии онро мӯътадил мегардонад, дар ҳоле ки ҳама ҳосилаҳои дигари индол ба серин 260 тавассути пайвандҳои гидрогении паҳлӯ пайваст мешаванд. Дар байни дигар йодоиндолҳои моделшуда, 2-иодоиндол дорои арзиши ҳатмии -5,248 ккал/мол мебошад, ки ин ба робитаи асосии гидрогени он бо лейцин 218 вобаста аст. Пайвастҳои дигари маълум иборатанд аз 3-иодоиндол (-4,3 ккал/мол), 4-иодоиндол (-4,0 ккал/мол) (-4,0 ккал/мол) ккал/мол) (Расми S8). Аксарияти индолҳои галогеншуда ва худи индол, ба истиснои 5-иодоиндол ва 2-иодоиндол, бо серин 260 пайвандро ташкил медиҳанд. Далели он, ки пайванди гидроген бо лейцин 218 аз пайвастагии самарабахши ретсепторҳо ва лигандҳо, тавре ки барои ивермектин мушоҳида шудааст, тасдиқ мекунад (Fig-iodoin5). 2-иодоиндол, ба монанди ивермектин, ба макони фаъоли ретсептори GluCL тавассути лейцин 218 сахт мепайвандад (расми 6 ва расми иловагӣ. S8). Мо пешниҳод менамоем, ки ин пайвастшавӣ барои нигоҳ доштани сохтори сӯрохиҳои кушодаи комплекси GluCL лозим аст ва тавассути пайвасти зич ба макони фаъоли ретсептори GluCL, 5-иодоиндол, 2-иодоиндол, авермектин ва ивермектин ба ин васила канали иониро кушода нигоҳ медорад ва имкон медиҳад, ки моеъро қабул кунад.
Пайвасткунии молекулавии индол ва индоли галогенӣ ба GluCL. Самтҳои ҳатмии (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole ва (D) 5-iodoindole лигандҳо ба макони фаъоли GluCL. Сафеда бо лента тасвир шудааст ва пайвандҳои гидрогении сутунмӯҳра ҳамчун хатҳои нуқтадори зард нишон дода шудаанд. (A'), (B'), (C') ва (D') таъсири мутақобилаи лигандҳои мувофиқро бо пасмондаҳои аминокислотаҳои атроф нишон медиҳанд ва пайвандҳои паҳлӯии занҷири гидрогенӣ бо тирҳои нуқтадори гулобӣ нишон дода шудаанд.
Барои бахо додан ба таъсири захрноки 5-иодоиндол ба сабзиши тухми карам ва шалцам тачриба гузаронда шуд. 5-иодоиндол (0,05 ё 0,1 мм) ё авермектин (10 мкг/мл) ба нашъунамои ибтидоӣ ва пайдоиши растанӣ таъсири кам ё тамоман надошт (Расми 7). Гайр аз ин, дар байни суръати нашъунамои растанихои назоратнашуда ва тухмихое, ки бо 5-иодоиндол ё авермектин кор карда шудаанд, тафовути калон пайдо нашуд. Таъсири дарозшавии реша ва шумораи решаҳои паҳлӯии ташаккулёфта ночиз буд, гарчанде ки 1 мм (10 маротиба аз консентратсияи фаъоли он) 5-иодоиндол инкишофи решаҳои паҳлуиро каме ба таъхир меандозад. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки 5-iodoindole барои ҳуҷайраҳои растанӣ заҳролуд нест ва ба равандҳои рушди растанӣ дар консентратсияи омӯхташуда халал намерасонад.
Таъсири 5-иодоиндол ба нашъунамои тухмй. Нашъунамо, сабзидан ва решакании паҳлӯии тухмии B. oleracea ва R. raphanistrum дар муҳити агари Мурашиге ва Скоог бо ё бе авермектин ё 5-иодоиндол. Нашъунамо пас аз 3 рӯзи инкубатсия дар ҳарорати 22 ° C ба қайд гирифта шудааст.
Ин тадқиқот якчанд ҳолатҳои куштани нематодҳоро аз ҷониби индолҳо гузориш медиҳад. Муҳим он аст, ки ин аввалин гузориш дар бораи метилизатсияи йодоиндол, ки метилизатсияро ба вуҷуд меорад (раванде, ки дар натиҷаи ҷамъшавии вакуолҳои хурд, ки тадриҷан ба вакуолҳои азим муттаҳид мешаванд, дар ниҳоят ба шикастани мембранаҳо ва марг оварда мерасонад) дар сӯзанҳои санавбар мебошад ва йодоиндол дорои хосиятҳои назарраси нематицидии шабеҳи нематицидии нематикӣ мебошад.
Қаблан гузориш дода шуда буд, ки индолҳо дар прокариотҳо ва эукариотҳо вазифаҳои зиёди сигнализатсияро иҷро мекунанд, аз ҷумла ҷилавгирӣ / ташаккули биофилм, зинда мондани бактерияҳо ва патогенӣ19,32,33,34. Ба наздикӣ, таъсири потенсиалии терапевтии индолҳои галогендор, алкалоидҳои индол ва ҳосилаҳои индоли нимсинтетикӣ таваҷҷӯҳи густурдаи тадқиқотро ҷалб карданд35,36,37. Масалан, индолҳои галогендор нишон дода шудаанд, ки ҳуҷайраҳои Escherichia coli ва Staphylococcus aureus-ро мекушанд37. Илова бар ин, омӯзиши самаранокии индолҳои галогенӣ дар муқобили дигар намудҳо, наслҳо ва салтанатҳо таваҷҷӯҳи илмӣ дорад ва ин таҳқиқот як қадаме дар роҳи расидан ба ин ҳадаф аст.
Дар ин ҷо, мо механизми марговари 5-иодииндолро дар C. elegans дар асоси осеби бозгашти ҳуҷайра (RCI) ва метилизатсия пешниҳод мекунем (Расмҳои 4C ва 5). Тағиротҳои вакуолавӣ ба монанди варам ва дегенератсияи вакуолярӣ нишондиҳандаҳои RCI ва метилизатсия мебошанд, ки ҳамчун вакуолҳои азим дар ситоплазма зоҳир мешаванд48,49. RCI ба истеҳсоли энергия тавассути кам кардани истеҳсоли ATP халал мерасонад, боиси нокомии насоси ATPase мегардад ё вайрон кардани мембранаҳои ҳуҷайра ва боиси воридшавии босуръати Na+, Ca2+ ва об мегардад50,51,52. Вакуолаҳои дохилицитоплазмӣ дар ҳуҷайраҳои ҳайвонот дар натиҷаи ҷамъ шудани моеъ дар ситоплазма аз ҳисоби воридшавии Ca2+ ва об ба вуҷуд меоянд53. Ҷолиб он аст, ки ин механизми вайроншавии ҳуҷайраҳо, агар осеб муваққатӣ бошад ва ҳуҷайраҳо ба тавлиди АТФ дар муддати муайян шурӯъ кунанд, аммо дар сурати давом кардан ё бад шудани он ҳуҷайраҳо мемиранд.54 Мушоҳидаҳои мо нишон медиҳанд, ки нематодҳое, ки бо 5-иодоиндол коркард шудаанд, пас аз дучор шудан ба шароити стресс қодир нестанд биосинтези муқаррариро барқарор кунанд.
Фенотипи метилизатсия, ки аз ҷониби 5-иодоиндол дар B. xylophilus ба вуҷуд омадааст, метавонад аз мавҷудияти йод ва тақсимоти молекулавии он бошад, зеро 7-иодоиндол нисбат ба B. xylophilus нисбат ба 5-иодоиндол таъсири камтари ингибиторӣ дошт (Ҷадвали 1 ва Расми S6). Ин натиҷаҳо қисман бо таҳқиқоти Малта ва дигарон мувофиқат мекунанд. (2014), ки гузориш доданд, ки интиқоли қисми нитрогени пиридил дар индол аз пара-ба мавқеи мета-вакуолизатсия, ҷилавгирӣ аз афзоиш ва ситотоксикӣ дар ҳуҷайраҳои U251 бекор карда шуда, нишон медиҳад, ки таъсири мутақобилаи молекула бо макони мушаххаси фаъол дар сафеда муҳим аст27,44,45. Таъсири мутақобила байни индолҳои индол ё галогендор ва ретсепторҳои GluCL, ки дар ин таҳқиқот мушоҳида шудаанд, ин мафҳумро дастгирӣ мекунанд, зеро 5- ва 2-иодидол нисбат ба дигар индолҳои тафтишшуда ба ретсепторҳои GluCL сахттар пайваст мешаванд (Расми 6 ва Расми S8). Муайян карда шуд, ки йод дар мавқеи дуюм ё панҷуми индол ба лейцин 218-и ретсептори GluCL тавассути пайвандҳои гидрогении сутунмӯҳра пайваст мешавад, дар ҳоле ки дигар индолҳои галогеншуда ва худи индол пайвандҳои заифи занҷири гидрогенро бо серин 260 ташкил медиҳанд (Расми 6). Аз ин рӯ, мо тахмин мезанем, ки локализатсияи галоген дар индуксияи дегенератсияи вакуолярӣ нақши муҳим мебозад, дар ҳоле ки пайвастагии зичи 5-иодоиндол канали ионҳоро кушода нигоҳ медорад ва ба ин васила воридшавии босуръати моеъ ва шикастани вакуолҳоро фароҳам меорад. Бо вуҷуди ин, механизми муфассали амали 5-iodoindol бояд муайян карда шавад.
Пеш аз истифодаи амалии 5-иодоиндол бояд таъсири заҳрноки онро ба растанӣ таҳлил кард. Тачрибаи нашъунамои тухмии мо нишон дод, ки 5-иодидол ба нашъунамои тухмй ва процессхои минбаъдаи тараккиёт дар концентрацияхои тадкикшуда таъсири манфй надорад (расми 7). Ҳамин тариқ, ин тадқиқот барои истифодаи 5-иодоиндол дар муҳити экологӣ барои назорат кардани зарари нематодҳои санавбар ба дарахтони санавбар замина фароҳам меорад.
Гузоришҳои қаблӣ нишон доданд, ки табобати бар асоси индол як равиши эҳтимолӣ барои ҳалли мушкилоти муқовимати антибиотикҳо ва пешрафти саратон мебошад55. Илова бар ин, индолҳо дорои фаъолиятҳои зиддибактериалӣ, зидди саратон, антиоксидант, зидди илтиҳобӣ, зиддидиабетикӣ, антивирусӣ, зидди пролиферативӣ ва зидди сил мебошанд ва метавонанд барои таҳияи доруҳо ҳамчун заминаи умедбахш хизмат кунанд56,57. Ин тадқиқот бори аввал истифодаи эҳтимолии йодро ҳамчун агенти зидди паразитӣ ва антигельминтӣ пешниҳод мекунад.
Авермектин се даҳсола пеш кашф шуда буд ва дар соли 2015 барандаи Ҷоизаи Нобел шуд ва истифодаи он ҳамчун доруи зидди антигельминтик ҳоло ҳам фаъолона идома дорад. Бо вуҷуди ин, аз сабаби рушди босуръати муқовимат ба авермектинҳо дар нематодҳо ва ҳашароти зараррасон, стратегияи алтернативӣ, камхарҷ ва аз ҷиҳати экологӣ тоза барои мубориза бо сирояти PWN дар дарахтони санавбар зарур аст. Ин тадқиқот инчунин дар бораи механизме, ки тавассути он 5-иодоиндол нематодҳои санавбарро мекушад ва 5-иодоиндол барои ҳуҷайраҳои растанӣ заҳролудшавии паст дорад, ки барои истифодаи ояндаи тиҷоратии он дурнамои хубро мекушояд.
Ҳама таҷрибаҳо аз ҷониби Кумитаи этикаи Донишгоҳи Йенгнам, Кёнсани Корея тасдиқ карда шуданд ва усулҳо мувофиқи дастурҳои Кумитаи этикаи Донишгоҳи Йеннам иҷро карда шуданд.
Таҷрибаҳои инкубатсия кардани тухмҳо бо истифода аз тартиби муқарраршуда43 гузаронида шуданд. Барои баҳодиҳии суръати хуруҷ (HR), нематодҳои калонсолони 1-рӯза (тақрибан 100 зан ва 100 нар) ба зарфҳои Петри, ки дар таркибаш занбӯруғ доранд, интиқол дода шуданд ва ба 24 соат иҷозат доданд. Пас аз он, тухмҳо ҷудо карда шуданд ва бо 5-иодоиндол (0,05 мм ва 0,1 мм) ё авермектин (10 мкг/мл) ҳамчун суспензия дар оби тозашудаи безарар коркард карда шуданд. Ин суспензияҳо (500 мкл; тақрибан 100 тухм) ба чоҳҳои пластинкаи фарҳанги бофтаи 24-чоҳ интиқол дода шуданд ва дар 22 °C инкубатсия карда шуданд. Ҳисобкунии L2 пас аз 24 соати инкубатсия гузаронида шуд, аммо агар ҳуҷайраҳо ҳангоми ҳавасмандкунӣ бо сими хуби платина ҳаракат накунанд, мурда ҳисобида мешуданд. Ин таҷриба дар ду марҳила гузаронида шуд, ки ҳар кадоми онҳо шаш маротиба такрор мешаванд. Маълумот аз ҳарду таҷриба муттаҳид ва пешниҳод карда шуд. Фоизи HR ба таври зерин ҳисоб карда мешавад:
Сатҳи марги кирмҳо бо истифода аз расмиёти қаблан таҳияшуда баҳо дода шуд. Тухмҳои нематод ҷамъоварӣ карда шуданд ва ҷанинҳо тавассути инкубкунӣ дар оби тозашудаи безарар ҳамоҳанг карда шуданд, то кирми марҳилаи L2 тавлид карда шаванд. Тухми синхронӣ (тақрибан 500 нематод) бо 5-иодоиндол (0,05 мм ва 0,1 мм) ё авермектин (10 мкг/мл) коркард карда шуда, дар лавҳаҳои B. cinerea Petri парвариш карда шуданд. Пас аз 48 соати инкубатсия дар 22 °C, нематодҳо дар оби тозашудаи безарар ҷамъоварӣ карда шуданд ва барои мавҷудияти марҳилаҳои L2, L3 ва L4 тафтиш карда шуданд. Мавҷудияти марҳилаҳои L3 ва L4 аз тағирёбии кирмҳо шаҳодат медод, дар ҳоле ки мавҷудияти марҳилаи L2 ҳеҷ гуна тағиротро нишон намедиҳад. Тасвирҳо бо истифода аз iRiS™ System Imaging Cell Digital ба даст оварда шуданд. Ин таҷриба дар ду марҳила гузаронида шуд, ки ҳар кадоми онҳо шаш маротиба такрор мешаванд. Маълумот аз ҳарду таҷриба муттаҳид ва пешниҳод карда шуд.
Заҳролудшавии 5-иодоиндол ва авермектин ба тухмҳо бо истифода аз санҷишҳои нашъунамо дар плитаҳои Мурашиге ва Скоог агар арзёбӣ карда шуд.62 Тухмиҳои B. oleracea ва R. raphanistrum аввал дар оби тозашуда барои як рӯз тар карда шуда, бо 1 мл 100% этаноли тиҷорӣ шуста, бо стерилизатсияшудаи 1 мл 100% этанол, мл3% стерилизатсия карда шуданд. гипохлорит) барои 15 дақиқа, ва панҷ маротиба бо 1 мл оби безарар шуста. Тухмиҳои стерилизатсияшуда пас аз он ба лавҳаҳои агар нашъунамо, ки дорои 0,86 г/л (0,2X) Мурашиге ва Скоог ва агар 0,7% бактериологӣ бо ё бе 5-иодоиндол ё авермектин доранд, пахш карда шуданд. Пас аз он, плитаҳо дар 22 °C инкубатсия карда шуданд ва тасвирҳо пас аз 3 рӯзи инкубатсия гирифта шуданд. Ин таҷриба дар ду марҳила гузаронида шуд, ки ҳар яки онҳо шаш маротиба такрор мешуд.
Вақти фиристодан: феврал-26-2025