Протеинҳои DELLA нигоҳ дошта мешавандтанзимгарони афзоишки дар рушди растанӣ дар посух ба сигналҳои дохилӣ ва беруна нақши марказӣ мебозанд. Ҳамчун танзимгарони транскрипсия, DELLa тавассути доменҳои GRAS-и худ ба омилҳои транскрипсия (TFs) ва гистони H2A пайваст мешаванд ва барои таъсир ба промоторҳо ҷалб карда мешаванд. Тадқиқотҳои ахир нишон доданд, ки устувории DELLA пас аз транслятсионӣ тавассути ду механизм танзим карда мешавад: полиубиквитинизатсия, ки аз ҷониби гормони растанӣ ба вуҷуд омадааст.гиббереллин, ки боиси таҷзияи босуръати онҳо ва конъюгасия бо модификатори хурди монанд ба убиквитин (SUMO) мегардад, ки ҷамъшавии онҳоро зиёд мекунад. Ғайр аз ин, фаъолияти DELLA бо ду механизми гуногуни гликозилизатсия ба таври динамикӣ танзим карда мешавад: O-фукозилизатсия таъсири мутақобилаи DELLA-TF-ро тақвият медиҳад, дар ҳоле ки тағирёбии N-ацетилглюкозамини бо O пайвастшуда (O-GlcNAc) таъсири мутақобилаи DELLA-TF-ро бозмедорад. Аммо, нақши фосфоризатсияи DELLA норавшан аст, зеро таҳқиқоти қаблӣ натиҷаҳои мухолифро нишон додаанд, ки баъзеҳо пешниҳод мекунанд, ки фосфоризатсия таҷзияи DELLA-ро мусоидат ё пахш мекунад ва дигарон пешниҳод мекунанд, ки фосфоризатсия ба устувории онҳо таъсир намерасонад. Дар ин ҷо, мо маконҳои фосфоризатсияро дар репрессори GA1-3 (RGA), AtDELLA, ки аз Arabidopsis thaliana бо спектрометрияи массавӣ тоза карда шудаанд, муайян мекунем ва нишон медиҳем, ки фосфоризатсияи ду пептиди RGA дар минтақаҳои PolyS ва PolyS/T фаъолияти RGA-ро тавассути мусоидат ба пайвастшавии H2A ва пайвастагии RGA бо промоторҳои мақсаднок афзоиш медиҳад. Қобили зикр аст, ки фосфоризатсия ба таъсири мутақобилаи RGA-TF ё устувории RGA таъсир нарасонд. Таҳқиқоти мо механизми молекулавиеро ошкор мекунад, ки тавассути он фосфорилизатсия фаъолияти DELLA-ро ба вуҷуд меорад.
Таҳлили массавии спектрометрии мо нишон дод, ки ҳам Pep1 ва ҳам Pep2 дар RGA дар заминаи Ga1-и норасоии GA хеле фосфорил шудаанд. Илова бар ин таҳқиқот, таҳқиқоти фосфопротеомӣ инчунин фосфорилизатсияи Pep1-ро дар RGA ошкор кардаанд, гарчанде ки нақши он ҳанӯз омӯхта нашудааст53,54,55. Баръакс, фосфорилизатсияи Pep2 қаблан тавсиф нашуда буд, зеро ин пептидро танҳо бо истифода аз трансгени RGAGKG муайян кардан мумкин буд. Гарчанде ки мутатсияи m1A, ки фосфорилизатсияи Pep1-ро бекор кард, фаъолияти RGA-ро дар растаниҳо каме коҳиш дод, он ҳангоми якҷоя бо m2A дар коҳиш додани фаъолияти RGA таъсири иловагӣ дошт (Расми иловагӣ 6). Муҳим он аст, ки фосфорилизатсияи Pep1 дар мутанти sly1, ки бо GA тақвият ёфтааст, дар муқоиса бо ga1 ба таври назаррас коҳиш ёфтааст, ки ин нишон медиҳад, ки GA дефосфорилизатсияи RGA-ро мусоидат мекунад ва фаъолияти онро коҳиш медиҳад. Механизме, ки тавассути он GA фосфорилизатсияи RGA-ро пахш мекунад, таҳқиқоти минбаъдаро талаб мекунад. Як эҳтимол ин аст, ки ин тавассути танзими протеинкиназаи номаълум ба даст оварда мешавад. Гарчанде ки таҳқиқот нишон доданд, ки ифодаи киназаи сафедаи CK1 EL1 аз ҷониби GA дар rice41 паст мешавад, натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки мутатсияҳои тартиби баландтари гомологи Arabidopsis EL1 (AEL1-4) фосфорилизатсияи RGA-ро кам намекунанд. Мувофиқи натиҷаҳои мо, як таҳқиқоти фосфопротеомӣ, ки ба наздикӣ бо истифода аз хатҳои аз ҳад зиёд ифодакунандаи Arabidopsis AEL ва мутанти сегонаи ael гузаронида шуд, ягон сафедаи DELLA-ро ҳамчун субстратҳои ин киназаҳо муайян накард56. Ҳангоми омода кардани дастнавис, гузориш дода шуд, ки GSK3, гени рамзгузории киназаи монанд ба GSK3/SHAGGY дар гандум (Triticum aestivum), метавонад DELLA (Rht-B1b)57-ро фосфорил кунад, гарчанде ки фосфорилизатсияи Rht-B1b аз ҷониби GSK3 дар растанӣ тасдиқ нашудааст. Реаксияҳои ферментативии in vitro дар ҳузури GSK3 ва пас аз таҳлили спектрометрияи массавӣ се макони фосфорилизатсияро ошкор карданд, ки дар байни доменҳои DELLA ва GRAS-и Rht-B1b ҷойгиранд (Расми иловагӣ 3). Ивазшавии серин ба аланин дар ҳар се макони фосфорилизатсия боиси коҳиши фаъолияти Rht-B1b дар гандуми трансгенӣ гардид, ки бо натиҷаҳои мо дар бораи он ки ивазшавии аланин дар Pep2 RGA фаъолияти RGA-ро коҳиш дод, мувофиқ аст. Бо вуҷуди ин, таҳлилҳои таҷзияи сафедаҳои in vitro минбаъд нишон доданд, ки фосфорилизатсия инчунин метавонад Rht-B1b57-ро устувор кунад. Ин бар хилофи натиҷаҳои мост, ки нишон медиҳанд, ки ивазшавии аланин дар Pep2 RGA устувории онро дар растанӣ тағйир намедиҳад. GSK3 дар гандум ортологи сафедаи 2-и брассиностероидҳои ҳассос ба брассиностероид 2 (BIN2) дар Arabidopsis 57 мебошад. BIN2 танзимгари манфии сигнализатсияи BR аст ва BR роҳи сигнализатсияи худро тавассути вайроншавии BIN2 58 фаъол мекунад. Мо нишон додем, ки коркарди BR устувории RGA 59 ё сатҳи фосфорилизатсияро дар Arabidopsis коҳиш намедиҳад (Расми иловагӣ 2), ки ин нишон медиҳад, ки эҳтимоли фосфорилизатсияи RGA аз ҷониби BIN2 кам нест.
Ҳамаи маълумоти миқдорӣ бо истифода аз Excel аз ҷиҳати оморӣ таҳлил карда шуданд ва фарқиятҳои назаррас бо истифода аз санҷиши t-и Стюдент муайян карда шуданд. Барои муайян кардани пешакии андозаи намуна ягон усули оморӣ истифода нашуд. Ҳеҷ маълумот аз таҳлил хориҷ карда нашуд; таҷриба тасодуфӣ набуд; ва муҳаққиқон ҳангоми таҷриба ва арзёбии натиҷа аз тақсимот огоҳ буданд. Андозаи намунаҳо дар ривоятҳои расмҳо ва дар файлҳои маълумоти хом оварда шудаанд.
Вақти нашр: 15 апрели соли 2025