Протеинҳои DELLA нигоҳ дошта мешавандтанзимкунандагони афзоишки дар инкишофи растанй дар чавоб ба сигналхои дохилй ва берунй роли марказй мебозанд. Ҳамчун танзимгарони транскриптӣ, DELLAҳо ба омилҳои транскрипсия (TFs) ва гистон H2A тавассути доменҳои GRAS худ пайваст мешаванд ва барои амал кардан ба промоутерҳо ҷалб карда мешаванд. Тадқиқотҳои охирин нишон доданд, ки устувории DELLA пас аз тарҷума бо ду механизм танзим карда мешавад: полиубиквитизатсия, ки аз ҷониби гормонҳои растанӣ ба вуҷуд омадаастгиббереллин, ки боиси таназзули босуръати онҳо ва конъюгация бо тағирдиҳандаи хурди ба убиквитин монанд (SUMO) мегардад, ки ҷамъшавии онҳоро зиёд мекунад. Ғайр аз он, фаъолияти DELLA бо ду механизми гликозилизатсия динамикӣ танзим карда мешавад: О-фукосилизатсия таъсири мутақобилаи DELLA-TF-ро тақвият медиҳад, дар ҳоле ки тағирот бо O-пайванди N-ацетилглюкозамин (O-GlcNAc) мутақобилаи DELLA-TF-ро бозмедорад. Бо вуҷуди ин, нақши фосфоризатсияи DELLA норавшан аст, зеро таҳқиқоти қаблӣ натиҷаҳои зиддунақиз нишон доданд ва баъзеҳо тахмин мезананд, ки фосфоризатсия таназзули DELLA-ро мусоидат мекунад ё пахш мекунад ва дигарон нишон медиҳанд, ки фосфоризатсия ба устувории онҳо таъсир намерасонад. Дар ин ҷо, мо маконҳои фосфоризатсияро дар репрессори GA1-3 (RGA), AtDELLA муайян мекунем, ки аз Arabidopsis thaliana тавассути масс-спектрометр тоза карда шудааст ва нишон медиҳад, ки фосфоризатсияи ду пептидҳои RGA дар минтақаҳои PolyS ва PolyS/T фаъолияти RGA-ро тавассути пешбурди пайвастани H2A ва мусоидат ба RGA ҳамчун ҳадаф афзоиш медиҳад. Қобили зикр аст, ки фосфоризатсия ба таъсири мутақобилаи RGA-TF ё устувории RGA таъсир нарасонд. Таҳқиқоти мо механизми молекулавиро ошкор мекунад, ки тавассути он фосфоризатсия ба фаъолияти DELLA мусоидат мекунад.
Таҳлили масс-спектрометрии мо нишон дод, ки ҳам Pep1 ва ҳам Pep2 дар RGA дар заминаи Ga1-кафи GA хеле фосфоризатсия шудаанд. Илова ба ин тадқиқот, таҳқиқоти фосфопротеомикӣ инчунин фосфоризатсияи Pep1-ро дар RGA ошкор карданд, гарчанде ки нақши он ҳанӯз омӯхта нашудааст53,54,55. Баръакси ин, фосфоризатсияи Pep2 қаблан тавсиф нашуда буд, зеро ин пептидро танҳо бо истифода аз трансгени RGAGKG метавон муайян кард. Гарчанде ки мутатсияи m1A, ки фосфоризатсияи Pep1-ро бекор кард, танҳо каме фаъолияти RGA-ро дар растанӣ коҳиш дод, он ҳангоми якҷояшавӣ бо m2A дар коҳиш додани фаъолияти RGA таъсири иловагӣ дошт (Расми иловагӣ). Муҳим он аст, ки фосфоризатсияи Pep1 дар мутант sly1-и бо GA мукаммалшуда дар муқоиса бо ga1 ба таври назаррас коҳиш ёфт, ки GA ба дефосфоризатсияи RGA мусоидат карда, фаъолияти онро коҳиш медиҳад. Механизме, ки тавассути он GA фосфоризатсияи RGA-ро пахш мекунад, таҳқиқоти минбаъдаро талаб мекунад. Як эҳтимолият ин аст, ки ин тавассути танзими киназаи сафедаи номаълум ба даст оварда мешавад. Гарчанде ки тадқиқотҳо нишон доданд, ки ифодаи киназаи сафедаи CK1 EL1 аз ҷониби GA дар rice41 паст карда мешавад, натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки мутатсияҳои дараҷаи олии гомологи Arabidopsis EL1 (AEL1-4) фосфоризатсияи RGA-ро кам намекунанд. Дар мувофиқа бо натиҷаҳои мо, тадқиқоти фосфопротеомии ба наздикӣ бо истифода аз хатҳои аз ҳад зиёд ифодакунандаи Arabidopsis AEL ва мутант сегонаи ael ягон сафедаи DELLA-ро ҳамчун субстратҳои ин киназаҳо муайян накарданд56. Вақте ки мо дастнависро омода кардем, гузориш дода шуд, ки GSK3, ген, ки як киназа ба GSK3/SHAGGY-ро дар гандум рамзгузорӣ мекунад (Triticum aestivum) метавонад DELLA (Rht-B1b)57-ро фосфор кунад, гарчанде ки фосфоризатсияи Rht-B1b аз ҷониби GSK3 дар нақша тасдиқ нашудааст. Реаксияҳои ферментативии in vitro дар ҳузури GSK3 ва пас аз таҳлили масс-спектрометрӣ се макони фосфоризатсияро ошкор карданд, ки дар байни доменҳои DELLA ва GRAS-и Rht-B1b ҷойгиранд (расми 3). Ивазкунии серин ба аланин дар ҳар се макони фосфоризатсия боиси кам шудани фаъолияти Rht-B1b дар гандуми трансгенӣ гардид, ки мувофиқи бозёфтҳои мо, ки ивазкунии аланин дар Pep2 RGA фаъолияти RGA-ро коҳиш медиҳад. Аммо, таҳлилҳои таназзули сафеда дар vitro минбаъд нишон доданд, ки фосфоризатсия инчунин метавонад Rht-B1b57-ро мӯътадил созад. Ин дар муқоиса бо натиҷаҳои мо нишон медиҳад, ки ивазкунии аланин дар Pep2 RGA устувории онро дар растаниҳо тағир намедиҳад. GSK3 дар гандум як ортологи протеини ба брассиностероид ҳассос 2 (BIN2) дар Arabidopsis 57 мебошад. BIN2 танзимгари манфии сигнализатсияи BR мебошад ва BR роҳи сигнализатсияи худро тавассути боиси таназзули BIN2 фаъол мекунад 58. Мо нишон додем, ки табобати BR сатҳҳои RGAphospopphosis ё устувории RGAphospphosisро коҳиш намедиҳад. 2), нишон медиҳад, ки RGA аз ҷониби BIN2 фосфоризатсия карда намешавад.
Ҳама маълумоти миқдорӣ бо истифода аз Excel ба таври оморӣ таҳлил карда шуданд ва фарқиятҳои назаррас бо истифода аз t-testи Student муайян карда шуданд. Ягон усулҳои оморӣ барои пешакӣ муайян кардани андозаи интихоб истифода нашудаанд. Ягон маълумот аз таҳлил хориҷ карда нашудааст; таҷриба тасодуфӣ набуд; ва муҳаққиқон аз тақсимот ҳангоми таҷриба ва арзёбии натиҷа огоҳ буданд. Андозаҳои намунаҳо дар ривоятҳои расм ва файлҳои маълумоти хом оварда шудаанд.
Вақти фиристодан: апрел-15-2025